Zenoaq STEMCELLBANKER?GMP等級(jí)干細(xì)胞凍存液

Zenoaq STEM-CELLBANKER?GMP Grade

特征:

STEM-CELLBANKER^??GMP grade 是ZENOAQ公司針對(duì)凍存各類貴重的干細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞 、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等）而特別配制，完全按照Good Manufacture Practice (GMP)規(guī)范進(jìn)行生產(chǎn)和質(zhì)量管理的細(xì)胞?組織凍存液。

• 有效提高各類干細(xì)胞的復(fù)蘇存活率，而不影響其染色體組形、增殖能力和分化能力。
• 不會(huì)對(duì)凍存細(xì)胞的DNA或RNA造成損傷，能用來凍存組織。
• 完全使用日/美/歐藥典等最高等級(jí)原料，所含成分明確。
• 不含異源動(dòng)物成分(Xeno-free)。
• 完全配方的凍存液，無需調(diào)配即可使用?？芍苯哟娣庞谪?fù)80度冰箱（不須程序降溫），省事省力省時(shí)間。

• 本產(chǎn)品已取得美國FDA和日本PMDA的Drug Master File (DMF)登記號(hào)。

規(guī)格包裝:

20ml, 100ml/瓶

產(chǎn)品應(yīng)用實(shí)例:

1. 使用STEM-CELLBANKER^?對(duì)人體胚胎干細(xì)胞（hESC） 和誘導(dǎo)多能（iPS）干細(xì)胞進(jìn)行實(shí)際凍存測(cè)試。

資料來源：瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科臨床科學(xué)部Outi Hovatta教授

測(cè)試凍存液：STEM-CELLBANKER^?凍存液 vs 常規(guī)細(xì)胞凍存液（細(xì)胞培養(yǎng)基 + 10% DMSO + 血清代替品）
細(xì)胞存活率評(píng)估方法：Trypan Blue 和 Live/Dead assay kit試劑盒

結(jié)果: 在沒有對(duì)細(xì)胞的染色體組形、增殖能力和分化能力造成影響的情況下，STEM-CELLBANKER^?凍存液明顯提高了HS293、HS306和ChiPSA細(xì)胞的存活率。上圖顯示STEM-CELLBANKER^?凍存細(xì)胞的復(fù)蘇存活率獲得明顯提高。下圖顯示各復(fù)蘇細(xì)胞的增殖能。

＊鳴謝Outi Hovatta教授和Frida Holm女士提供以上資料

2. 使用STEM-CELLBANKER^?對(duì)人體間質(zhì)干細(xì)胞（Human Mesenchymal Stem Cells）和血管內(nèi)皮前體細(xì)胞（Endothelial Progenitor Cells）進(jìn)行實(shí)際凍存測(cè)試。

筑波大學(xué)再生醫(yī)療講座　大根田修教授提供

	MSCs	EPCs
STEM-CELLBANKER?	>95%	>90%

細(xì)胞株：人體臍帶血來源間質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）和血管內(nèi)皮前體細(xì)胞（EPCs）
測(cè)試凍存液：STEM-CELLBANKER^?細(xì)胞凍存液
細(xì)胞凍存方法：凍存細(xì)胞于-80度冰箱, ３日后移至-192度液氮管，凍存72 日后復(fù)蘇。.
細(xì)胞存活率評(píng)估方法：Trypan Blue

測(cè)試結(jié)果：MSCs 和EPCs的存活率分別高達(dá)95%　和　90%以上。結(jié)果也顯示STEM-CELLBANKER^?細(xì)胞凍存液沒有對(duì)干細(xì)胞的增殖和分化能力造成影響。

欲知詳細(xì)內(nèi)容，請(qǐng)參考?MSCs?或?EPCs

＊鳴謝　大根田修(Ohneda Osamu)教授和長(zhǎng)野真澄(Nagano Masumi)博士提供以上資料

3. 使用STEM-CELLBANKER^?對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞（129SV）進(jìn)行實(shí)際凍存測(cè)試。

ZENOAQ研究所　細(xì)胞工學(xué)組

細(xì)胞株：129SV (Mouse ES cell)
測(cè)試凍存液：ZENOAQ 產(chǎn)品（CELLBANKER^??1, 1plus, 2 和 STEM-CELLBANKER^?）

使用手冊(cè) (適用于CELLBANKER^?系列各產(chǎn)品) :

細(xì)胞冷凍保存方法

選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)數(shù)的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。

1. 按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。
2. 按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。
   （參考：5×105 至 5×106 cells/ml）。
3. 取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件：1,000~2,000rpm，4°C，3至5分)。移去離心管中的上清液。
4. 加入適量的CELLBANKER^??細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為 5×105 至 5×106 cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液。
5. 將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。
6. 直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80°C冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存。
7. 若研究者需要液氮保存時(shí)，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80°C冰箱后至少一晝夜）移至-196°C液氮罐。

細(xì)胞數(shù)僅作為參考數(shù)據(jù)，依據(jù)各自目的可有不同

凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法

1. 從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管，立即放入37°C 振動(dòng)水浴槽中快速解凍。
2. 待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。
3. 離心收集培養(yǎng)細(xì)胞((參考離心條件：1,000~2,000rpm，4°C，3至5分)，移去上清液。
4. 清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液。
5. 加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。
6. 精檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

4. 使用STEM-CELLBANKER^?對(duì)小鼠正常腎臟組織進(jìn)行凍存測(cè)試

資料來源：ZENOAQ中央研究所

STEM-CELLBANKER??→ -80℃
HE染色標(biāo)本	Caspase3免疫染色標(biāo)本

取材后立刻以福爾馬林固定
HE染色標(biāo)本	Caspase3免疫染色標(biāo)本

從小鼠取出5mm3大小的腎臟組織，投入1ml的STEM-CELLBANKER^?凍存液后直接放置于負(fù)80度冰箱進(jìn)行凍結(jié)。之后，對(duì)經(jīng)解凍、清洗、福爾馬林固定和石蠟包埋的組織塊進(jìn)行HE染色和Caspase3染色。組織學(xué)檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未經(jīng)凍結(jié)的組織狀態(tài)（對(duì)照）相比， STEM-CELLBANKER^?凍存組織塊沒有受到明顯的損傷，證明STEM-CELLBANKER^?能夠應(yīng)用于凍結(jié)組織塊。此外，Caspase3染色結(jié)果呈陰性反応，表示沒有細(xì)胞凋亡發(fā)生。

5. 利用微陣列芯片（Microarray）對(duì)STEM-CELLBANKER^?凍存細(xì)胞展開基因表達(dá)分析

從未經(jīng)凍存的培養(yǎng)細(xì)胞和經(jīng)STEM-CELLBANKER^?凍存的細(xì)胞抽出total RNA，以微陣列解析進(jìn)行遺傳基因的平行對(duì)比分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組細(xì)胞的大多數(shù)基因之間的表達(dá)變化小于1.6倍。

測(cè)試細(xì)胞：小鼠肺纖維芽細(xì)胞

參考文獻(xiàn)

• Shimazu et al. (2015) Serum- and xeno-free cryopreservation of human umbilical cord tissue as mesenchymal stromal cell source. Cytotherapy, 2015; 17: 593 – 600.
• Nakagawa M et al. (2014) A novel efficient feeder-free culture system for the derivation of human induced pluripotent stem cells. Scientific Reports 4 Article, number:359.
• Miyamoto Y et al. (2012) Cryopreservation of Induced Pluripotent Stem Cells. Cell Medicine., Vol. 3, pp. 89-95, 2012.
• Saliem M et al. (2012) Improved cryopreservation of human hepatocytes using a new xeno free cryoprotectant solution. World J Hepatol. May 27;4(5):176-83.
• Holm et al. (2010) An effective serum- and xeno-free chemically defined freezing procedure for human embryonic and induced pluripotent stem cells. Hum Reprod. 25(5):1271-9. Epub 2010 Mar 5.
• Nakamura A et al. (2010) Human primary cultured hepatic stellate cells can be cryopreserved. Med Mol Morphol. 43:107-115.

產(chǎn)品成分說明:

限定化學(xué)成分細(xì)胞凍存液，含有DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分、pH調(diào)節(jié)劑等國際藥典 ［美、歐、日本藥方局級(jí)］成分。

儲(chǔ)存方法

儲(chǔ)存于４度以下。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起算，為期３年。3個(gè)月以上沒有使用CELLBANKER^?凍存液的計(jì)劃時(shí)，盡可能冷凍保存。為避免重復(fù)凍結(jié)-解凍過程可能導(dǎo)致的CELLBANKER^?品質(zhì)下降和性能降低，推薦將 100mL 產(chǎn)品分裝小瓶后，再存放于 4°C以下或－20°C冰箱凍存。

質(zhì)量保障承諾

1. STEM-CELLBANKER^??GMP grade細(xì)胞凍存液經(jīng)過嚴(yán)格內(nèi)毒素、pH、滲透壓和微生物檢查，確保產(chǎn)品不含細(xì)菌、霉菌以及支原體。
2. 使用小鼠胚胎干細(xì)胞（Mouse ES Cells）、Jurkat　和SK-007細(xì)胞驗(yàn)證性能測(cè)試凍存細(xì)保存活率達(dá)８０％以上．

注意事項(xiàng)

1. CELLBANKER^?系列產(chǎn)品只供實(shí)驗(yàn)室研究使用，是試劑級(jí)產(chǎn)品。
2. 我們推薦用戶在使用本產(chǎn)品之前，事先對(duì)所使用的細(xì)胞進(jìn)行至少為期 1 周的
   試驗(yàn)性細(xì)胞冷凍保存培養(yǎng)。確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存。
3. 免責(zé)聲明: 本公司將不為任何不正常使用此產(chǎn)品時(shí)所發(fā)生的意外負(fù)責(zé)。